Day 11 | 📈 HPLC 원리와 크로마토그램 해석 기본

안녕하세요.
중소 제약회사에서 QC로 근무 중인 ssub0w0입니다.
지난 포스팅에서는 안정성 시험(Stability Test)에 대해 살펴봤습니다.

아마 제약업계에 관심을 갖으시는 분이 어느정도 있으실거라 생각됩니다.

저도 비록 엄청 대단한 사람은 아니지만 그래도 품질관리원으로서 여러분들에게 작게나마 도움이 되셨으면 하는 마음에 포스팅을 하다보니 벌써 11번째 포스팅이 되었네요 ㅎㅎ
오늘은 제약 QC에서 가장 많이 사용하는 분석 장비 중 하나인 HPLC(High Performance Liquid Chromatography)와 크로마토그램 해석 기본에 대해 이야기해보겠습니다.

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🔍 HPLC란 무엇인가?

HPLC는 고성능 액체 크로마토그래피로,
혼합물 속에서 원하는 성분을 분리하고 정량하는 대표적인 분석법입니다.

원리는 간단히 말해 고압 펌프로 용매(이동상)를 흐르게 하여 시료를 칼럼(고정상)과 만나게 하고, 성분별 분리된 신호를 검출기(Detector)로 측정하는 방식입니다.

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⚗️ HPLC의 기본 원리

1. 이동상 (Mobile Phase)
   • 시료를 밀어주는 액체
   • 물, 아세토니트릴, 메탄올 등이 자주 쓰임
   • 조성(비율)과 pH 조절에 따라 분리 결과 달라짐
2. 고정상 (Stationary Phase)
   • 시료가 머무는 칼럼 내부 충전제
   • 보통 C18(ODS) 컬럼이 대표적
   • 성분별 친화도 차이에 따라 머무는 시간 달라짐
3. 검출기 (Detector)
   • 가장 많이 쓰이는 건 UV Detector
   • 특정 파장에서 흡광도를 측정 → 크로마토그램으로 출력

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📈 크로마토그램 해석 기본

HPLC 분석 결과는 **크로마토그램(Chromatogram)**이라는 그래프로 표현됩니다.
세로축(Y축)은 검출기 반응(Absorbance), 가로축(X축)은 시간(Retention Time, RT)입니다.

1️⃣ 머무름 시간 (Retention Time, RT)

• 각 성분이 칼럼에서 빠져나오는 시간
• 동일 조건에서 항상 일정 → 성분 동정(Identification)에 활용

2️⃣ 피크 면적 (Peak Area)

• 검출된 신호의 크기
• 시료 농도와 비례 → 정량(Quantification)에 활용

3️⃣ 분리도 (Resolution)

• 피크 간 간격이 충분히 떨어져 있어야 정확한 해석 가능
• 분리도가 낮으면 피크가 겹쳐 결과 신뢰도 떨어짐

4️⃣ 테일링/프론팅 (Peak Shape)

• 피크가 좌우로 늘어지는 현상
• 주로 칼럼 오염, 시료 과량, 이동상 조건 불안정 때문에 발생

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🧪 QC에서 HPLC 활용 예시

• 함량 시험 (Assay): 주성분이 규격 농도에 맞는지 확인
• 불순물 시험 (Impurity Test): 미량 불순물 검출 및 정량
• 확인 시험 (Identification Test): RT 비교로 성분 확인

HPLC는 특히 원료·완제품 시험에서 가장 핵심적인 도구입니다.

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⚡ 현직자의 경험담

QC 실무에서 HPLC는 하루에도 몇 번씩 돌리는 장비입니다.
처음엔 크로마토그램이 단순한 그래프처럼 보이지만, 실제로는 작은 피크 하나에도 많은 의미가 숨어 있습니다.
예를 들어, 불순물 피크가 예상치 못한 위치에 나타나면 즉시 원인 분석에 들어가야 하고, 경우에 따라 제조 공정 전체가 중단되기도 합니다.

그래서 HPLC는 단순한 분석 장비가 아니라, QC의 눈과 같은 존재라고 생각합니다.

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✅ 정리

• HPLC는 고성능 액체 크로마토그래피로, QC에서 가장 많이 쓰이는 분석 장비
• 주요 요소: 이동상, 고정상, 검출기
• 크로마토그램 해석 기본: RT(머무름 시간), Peak Area(정량), Resolution(분리도), Peak Shape
• QC는 HPLC를 통해 확인시험, 함량시험, 불순물 시험을 수행

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✨ 마무리

오늘은 HPLC 원리와 크로마토그램 해석 기본에 대해 살펴봤습니다.
그래프 위 작은 피크 하나가 단순한 선이 아니라, 환자의 안전을 보증하는 근거라는 점에서 QC의 책임은 막중합니다.
내일 Day 12에서는 💧 수분·회분 시험 기본을 다루겠습니다.
궁금한 점이 있다면 댓글 남겨주세요!!
QC를 준비하는 여러분을 응원합니다 🙌